慢病毒濃縮液
| 産(chǎn)品貨号 | 規格 | 價格 |
| FZ012-03 | 3 mL | 149 元 |
| FZ012-15 | 15 mL | 459 元 |
| FZ012-50 | 25 mL X 2 | 799 元 |
濃縮步驟操作(zuò)簡便，無需超速離心或過柱純化- 濃縮後病毒滴度可(kě)提高5-50倍，回收率可(kě)達60%-70%
- 有(yǒu)效去除雜質(zhì)，降低病毒液額外細胞毒性
本産(chǎn)品是一種簡單、快速、高效的可(kě)以用(yòng)于多(duō)種常見重組病毒濃縮的試劑盒，無需超速離心或過柱，濃縮後病毒滴度可(kě)提高 5-50 倍，并能(néng)有(yǒu)效去除病毒上清液中(zhōng)含有(yǒu)的大量血清蛋白、細胞碎片、基因組 DNA 等。
産(chǎn)品優勢
1. 使用(yòng)便捷。隻需将病毒沉澱試劑(5X)與含病毒的上清液按照 1:4 的比例混合，4 ºC 孵育後離心，用(yòng)自備的 PBS 或基礎培養基重懸病毒沉澱即可(kě)。
2. 無需使用(yòng)超高速離心機長(cháng)時間離心，普通冷凍離心機 3000-8000 × g 離心 30 min 即可(kě)。
3. 病毒濃縮效率高，純化效果好。使用(yòng)本産(chǎn)品進行病毒濃縮後，病毒滴度可(kě)提高 5-50 倍，并能(néng)有(yǒu)效去除病毒上清液中(zhōng)含有(yǒu)的絕大部分(fēn)蛋白、細胞碎片、基因組 DNA 等。儲存及運輸條件冰袋運輸。試劑置于 4 ℃保存，有(yǒu)效期一年。
使用(yòng)方法
1. 取收集得到的含病毒的上清液，使用(yòng) 0.45 μm 針頭濾器(PES)過濾以充分(fēn)沉澱細胞碎片。
注：過濾時，須使用(yòng)聚醚砜膜(PES)的針頭濾器，其它材質(zhì)如硝酸纖維(NC)膜可(kě)能(néng)對病毒有(yǒu)吸附作(zuò)用(yòng)。
2. 取過濾後的病毒原液 40 mL，加入 10 mL 4 ºC 預冷的病毒濃縮液（病毒原液的 1/4 體(tǐ)積），充分(fēn)混勻後放于 4 ℃，每 30 min 混合一次，共進行 4~6 次混勻。繼續于 4 ºC 放置 6-18 h。
注 1：病毒沉澱試劑(5X)粘性較大，需緩慢吸取，緩慢加入，并且與病毒上清液充分(fēn)混勻。
注 2：病毒沉澱過程中(zhōng)須保持 4ºC，溫度偏高時，會導緻沉澱不充分(fēn)。
注 3：4℃孵育充分(fēn)後通常溶液會變渾濁，更長(cháng)的孵育時間（如 4℃過夜）有(yǒu)助于提高病毒回收率，如果樣品體(tǐ)積大，如超過 100ml，建議延長(cháng)孵育時間，但孵育時間不宜超過 24h。
3. 孵育結束後，3000-8000 x g，4℃離心 30 min，此時離心管底通常可(kě)見白色沉澱（有(yǒu)時沉澱不可(kě)見），小(xiǎo)心吸棄上清，離心 1~2min，吸走殘餘液體(tǐ)。加入原病毒上清液體(tǐ)積的1/10~1/100 的病毒溶解液（PBS 或培養基）（可(kě)通過降低病毒溶解液的體(tǐ)積來獲得濃度更大的病毒液），使用(yòng)移液器小(xiǎo)心吹打 20~30 次，重懸病毒沉澱（有(yǒu)時沉澱不可(kě)見，需要在沉澱可(kě)能(néng)形成的區(qū)域用(yòng)移液器小(xiǎo)心吹打）。根據後續需要，适當分(fēn)裝(zhuāng)後于-80ºC 凍存備用(yòng)。
注 1：避免劇烈吹打，産(chǎn)生氣泡可(kě)能(néng)導緻病毒失活。
注 2：白色沉澱中(zhōng)除病毒顆粒外，還有(yǒu)極少量血清蛋白和基因組 DNA 等
NC-shRNA陰性慢病毒使用(yòng)E-poly™ Fast-Lv包裝(zhuāng)試劑盒正向包毒48小(xiǎo)時後收毒，測定病毒上清液出毒滴度為(wèi)2E8 TU/mL。而後采用(yòng)慢病毒濃縮液分(fēn)别進行10X和20X濃縮後染毒結果對比如下：
某過表達慢病毒（轉移質(zhì)粒大小(xiǎo)約10 kb）使用(yòng)E-poly™ Fast-Lv包裝(zhuāng)試劑盒正向包毒48小(xiǎo)時後收毒，測定病毒上清液出毒滴度分(fēn)别為(wèi)5E6 TU/mL和1E7 TU/mL。而後采用(yòng)慢病毒濃縮液分(fēn)别進行10X和80X濃縮後染毒結果對比如下：
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